SYBR Green Ⅰ荧光PCR熔解曲线鉴定鸟分枝杆菌方法的建立及初步应用

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的基于SYBR GreenⅠ荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌（Mycobacterium avium,MA）的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插入序列IS1311为检测靶标设计引物,在60℃的退火温度下,建立鉴定MA的SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为"金标准",鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性。结果 SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA,检测限为5.6×10-2 ng/μL。200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义（P>0.05）;两法符合率为99.5%（199/200）,一致性较高（Kappa值>0.75,P<0.01）;建立方法的敏感性为93.8%（15/16）,特异性为100.0%（184/184）,阳性预测值为100.0%（15/15）,阴性预测值为99.5%（184/185）。结论以MA特异性重复序列IS1311为基础建立的SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径。

【关键词】 鸟分枝杆菌 SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线 测序

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